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反相液相色譜法分離和測(cè)定富馬酸
2011-11-03 [6208]

摘 要 采用反相液相色譜法測(cè)定富馬酸。在μ-Bondapark C18色譜柱上以含0.5%乙酸的水溶液作為流動(dòng)相能較好地分離富馬酸和馬來(lái)酸試樣,當(dāng)其流速為1.0 mL/min時(shí),富馬酸與馬來(lái)酸的分離因子的分離度達(dá)1.52。該方法操作簡(jiǎn)便、快速、定量準(zhǔn)確、可靠。

1 引  言
  富馬酸是一種重要的精細(xì)化工產(chǎn)品的原料。它可用于合成不飽和聚酯樹(shù)脂,它與醋酸乙烯的共聚物是良好的粘合劑,與苯乙烯的共聚物是制造玻璃鋼的材料;它也是一種食品添加劑(酸味劑),并可用于合成新型防霉劑——霉克星。此外,它也是重要的醫(yī)藥原料,如反丁烯二酸鐵用于冶療小紅血球型貧血的富血鐵1〕。有關(guān)其殘留的分析測(cè)定國(guó)內(nèi)外已有報(bào)道〔25〕,但有關(guān)其工業(yè)生產(chǎn)的控制分析國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。我們采用反相液相色譜法分離和測(cè)定工業(yè)產(chǎn)品中富馬酸含量以及馬來(lái)酸樣品中富馬酸雜質(zhì)含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,該方法*適合于工業(yè)產(chǎn)品中富馬酸的含量的測(cè)定和馬來(lái)酸試樣中富馬酸雜質(zhì)的測(cè)定。

2
 實(shí)驗(yàn)部分
2.1
 試劑和儀器
  Shimadzau LC-4A液相色譜儀;Waters 4801 液相色譜光譜檢測(cè)儀;Waters 991二極管陣列檢測(cè)儀;Shimadzu C-R2A色譜數(shù)據(jù)處理儀;
  富馬酸標(biāo)準(zhǔn)品:99%(浙江工業(yè)大學(xué)化工學(xué)院精細(xì)化工研究室);馬來(lái)酸標(biāo)準(zhǔn)品:98%(浙江工業(yè)大學(xué)化工學(xué)院精細(xì)化工研究室);其它所用試劑均為分析純?cè)噭?。富馬酸及馬來(lái)酸樣品是由浙江工業(yè)大學(xué)精細(xì)化工研究室提供的小試合成樣品。
2.2
 液相色譜條件
  色譜柱: C18色譜柱(30 cm×3.9 mm I.D);流動(dòng)相:含0.5%乙酸的水溶液;流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):240 nm(靈敏度為0.01 AU)。進(jìn)樣量:20μL
www.lc-gc.com為您提供。
  在此操作條件下,富馬酸和馬來(lái)酸樣品及其標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖如圖1所示。
 

 圖1 富馬酸試樣的色譜圖
 Fig.1 Chromatogram of fumaric acid samples
 a.富馬酸和馬來(lái)酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(standard solution of fumaric acid and malic acid mixture)b.富馬酸樣品(fumaric acid sample);c.馬來(lái)酸樣品(malic acid sample)1.馬來(lái)酸(malic acid);2.富馬酸(fumaric acid)
μ-Bondapark C18
色譜柱(30 cm×3.9 mm I.D)。

2.3
 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
  準(zhǔn)確稱取富馬酸標(biāo)準(zhǔn)品約0.015 g(至±0.01 mg)置于10 mL容量瓶中,用5 mL甲醇解并用流動(dòng)相稀釋至刻度。然后逐步稀釋得不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,其濃度分別為1.5×10-3,3.0×10-34.5×10-36.0×10-3,7.5×10-310.5×10-3,15.0×10-3 g/L
2.4
 樣品溶液的配制
  準(zhǔn)確稱取一定量試樣(至±0.01 mg)置于10 mL容量瓶中,用5 mL甲醇溶解并用流動(dòng)相稀釋至刻度。然后逐步稀釋至一定濃度,待測(cè)定。

3
 結(jié)果與討論
3.1
 流動(dòng)相選擇
  作者首先考察了不同流動(dòng)相對(duì)試樣中富馬酸與其雜質(zhì)的分離效果,發(fā)現(xiàn)試樣在100%甲醇為流動(dòng)相和以純水為流動(dòng)相時(shí)試樣中的富馬酸及雜質(zhì)馬來(lái)酸等出峰較快,基本上與溶劑一起流出,而當(dāng)流動(dòng)相為含乙酸水溶液時(shí)富馬酸與馬來(lái)酸等之間具有較好的分離效果,而且流動(dòng)相中乙酸含量不同對(duì)其分離效果產(chǎn)生明顯影響。
   隨著乙酸濃度的增加,馬來(lái)酸的容量因子(k′1)隨之減少,而富馬酸的容量因子(k′2)先隨乙酸濃度的增加而增加,當(dāng)乙酸濃度>1.0%時(shí),其容量因子顯著減少。從而使馬來(lái)酸與富馬酸之間的分離因子(α)和分離度(R)在流動(dòng)相中乙酸濃度為1.0%時(shí),兩者均達(dá)到zui大值,即α=2.02,R=2.32。同時(shí)考慮到色譜柱的使用壽命,我們認(rèn)為采用含0.5%乙酸水溶液為流動(dòng)相較為合適,因?yàn)楫?dāng)采用0.5%乙酸水溶液為流動(dòng)相時(shí),馬來(lái)酸與富馬酸之間的分離因子和分離度分別達(dá)1.621.52,已滿足定量測(cè)定要求。
3.2
 流速的影響
  實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,當(dāng)以含0.5%乙酸水溶液為流動(dòng)相時(shí),在室溫下改變其流速時(shí),其保留時(shí)間、柱效均發(fā)生變化,即隨著流速的降低,保留時(shí)間和柱效隨之增加,而容量因子(k′)基本不變。這是由于流速降低時(shí),流動(dòng)相中傳質(zhì)阻力Hm、停滯流動(dòng)相中傳質(zhì)阻力Hsm和固定相內(nèi)傳質(zhì)阻力Hs都降低,縱向分子擴(kuò)散雖有所增加,但在此濃度范圍內(nèi),前三項(xiàng)的影響是主要的,后一項(xiàng)可忽略。因此,流速降低,柱效增大。而容量因子(k′)是熱力學(xué)參數(shù),它與流動(dòng)相的流速無(wú)關(guān),因此流動(dòng)相的流速的變化基本不影響馬來(lái)酸與富馬酸之間的分離因子,其α=1.57,流速選為1.0 mL/min。
3.3
 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇
  富馬酸是一個(gè)不飽和有機(jī)酸,它受紫外光的激發(fā)后可以發(fā)生σ→π*,π→π*,n→π*躍遷,因此它在紫外的短波區(qū)有強(qiáng)烈的吸收λmax,CH3OH=207 nm。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在乙酸/水體系中富馬酸在λ=240 nm附近有強(qiáng)吸收。
  乙酸濃度對(duì)富馬酸和馬來(lái)酸的紫外吸收帶有著明顯的影響,當(dāng)乙酸濃度增加時(shí),富馬酸的zui大吸收波長(zhǎng)顯著向長(zhǎng)波方向位移,即產(chǎn)生紅移。當(dāng)乙酸濃度從0.5%增加到2.0%時(shí),富馬酸的zui大吸收波長(zhǎng)從236 nm位移至248 nm。并且,隨著乙酸濃度的增加,兩者的紫外吸收譜帶變狹。為此,選用0.5%乙酸溶液為流動(dòng)相時(shí),測(cè)定波長(zhǎng)選擇為λ=240 nm。
3.4
 溶劑的選擇
  實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,試樣經(jīng)甲醇溶解后采用不同溶劑稀釋,其色譜圖明顯不同,如用水稀釋時(shí)色譜圖中產(chǎn)生一個(gè)較大的體系峰(負(fù)峰),而且該體系峰與馬來(lái)酸的色譜峰非常接近;而采用流動(dòng)相稀釋時(shí),體系峰較小,使體系峰與馬來(lái)酸的峰*分離。因此,選擇流動(dòng)相作為稀釋溶劑。
3.5
 方法的線性范圍和檢測(cè)限
  將不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液在上述選定的色譜測(cè)定條件下分別進(jìn)行分析測(cè)定,進(jìn)樣體積為20 μL。以濃度(C)為橫坐標(biāo),面積A)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,富馬酸的濃度在2.4×10-312.2×10-3 g/L內(nèi),富馬酸的濃度與其峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,線性回歸方程為A=0.1933C+0.0452r=0.9979)。方法的檢測(cè)限為7.7×10-2 mg/L(按信噪比21)。
3.6
 精密度和準(zhǔn)確度
  為了考察該方法的重現(xiàn)性,對(duì)同一試樣進(jìn)行了5次重復(fù)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.81,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.91%。
  在已知含量的樣品中加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)品后進(jìn)行多次測(cè)定。測(cè)得富馬酸的回收率為 98.86%103.9%,平均回收率為101.0%。


1 樣品中富馬酸含量測(cè)定結(jié)果
Table 1
 Determination results of concentration of fumaric acid in sample
 

樣 品
Sample 
測(cè)定結(jié)果 Determination results (%) 平均值
Mean value (%) 
1 2 3 
馬來(lái)酸樣品 Malic acid sample  8.80  9.06  8.84  8.90 
富馬酸樣品 Fumaric acid sample 88.74 87.50 87.96 88.07 

3.7
 實(shí)際樣品的測(cè)定
  該方法用于測(cè)定富馬酸和馬來(lái)酸樣品中富馬酸含量,結(jié)果見(jiàn)表1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,該方法*適合于富馬酸產(chǎn)品和馬來(lái)酸產(chǎn)品中富馬酸含量測(cè)定。

作者單位:施介華(浙江工業(yè)大學(xué)化工學(xué)院,杭州 310032
     徐秀珠浙江大學(xué)分析測(cè)試中心,杭州 310027

References
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